Préparation de fractions subcellulaires à partir de cellules leucémiques : une méthode pour générer des fractions cellulaires et nucléaires à partir de cellules leucémiques

- Dans les cellules leucémiques, la navette de macromolécules, telles que quelques protéines suppressives de tumeurs entre le noyau et le cytoplasme, est dérégulée. Une mauvaise localisation de ces protéines les rend inactives, ce qui entraîne une croissance incontrôlée des cellules leucémiques. Nous pouvons déterminer l’emplacement aberrant de ces protéines en générant la fraction cytoplasmique et nucléaire à partir de cellules leucémiques.

Commencez par prendre le volume souhaité de cellules leucémiques dans un tube à microfuge et centrifugez pour granuler la cellule. Remettez la pastille en suspension dans un tampon de lyse hypotonique, puis ajoutez la concentration souhaitée de détergent. Le tampon de lyse hypotonique provoque le gonflement des cellules et la rupture de la membrane plasmique, laissant la membrane nucléaire intacte, isolant ainsi les fractions cytoplasmiques. Le détergent aide à l’extraction des protéines des organites cytoplasmiques.

Centrifugez les cellules lysées en suspension et transférez le surnageant dans un tube frais. Le surnageant contient la fraction cytoplasmique de la cellule. Pour préparer la fraction nucléaire, remettre en suspension la pastille r