Prélèvement de moelle osseuse sur une patte postérieure de souris

- La moelle osseuse est le tissu gélatineux spongieux présent au centre creux des os. Il contient des cellules souches hématopoïétiques, qui produisent les cellules sanguines, un composant clé du système immunitaire. L’isolement de la moelle osseuse à partir d’os plus gros, tels que le fémur et le tibia, permet un rendement cellulaire élevé.

Pour prélever de la moelle osseuse, placez une souris euthanasiée en position couchée et stérilisez la peau à l’éthanol. Coupez la cavité abdominale et retirez la peau pour exposer les membres postérieurs. Cassez le tibia, un os long de la jambe, et placez-le dans du PBS froid pour maintenir les conditions physiologiques. Disloquer la rotule et retirer les muscles pour exposer le fémur, l’os de la cuisse.

Coupez le fémur du bas de l’os et placez-le dans du PBS froid. Percez un trou dans un tube de microcentrifugation de plus petit volume et placez-y les deux os avec l'extrémité ouverte des os face au trou. Placez le tube contenant les os dans un tube de microcentrifugation de plus grand volume et centrifugez les tubes à double couche pour granuler la moelle osseuse. Utilisez la moelle osseuse prélevée pour une analyse plus approfondie. Dans ce protocole, nous allons prélever de la moelle osseuse sur les membres postérieurs d’une souris.

- Pour un prélèvement de moelle osseuse, placez une souris C57 black-6 de 6 à 10 semaines en position couchée sur un tampon chirurgical stérile et utilisez de l’éthanol à 70 % pour stériliser l’abdomen et les membres postérieurs. Utilisez une paire de ciseaux chirurgicaux à dissection pour ouvrir la cavité abdominale et retirez la peau pour exposer les membres postérieurs. À l’aide d’une paire de pinces à pansement à pointe émoussée, tenez le tibia de la souris juste en dessous de la cheville et utilisez une paire de pinces à pansement incurvées pour stabiliser le tibia sous la pince à pansement à pointe émoussée.

Utilisez la pince à pansement à bout émoussé pour briser le tibia et retirer le muscle pour exposer l’os, avant de placer le tibia dans du PBS froid. Déplacez la pince de pansement incurvée stabilisatrice vers le fémur et glissez la pince de pansement à pointe émoussée sous l’articulation du genou pour maintenir la rotule. Tirez doucement vers le haut pour disloquer la rotule et retirez le muscle de la rotule pour exposer le fémur. Tenez le fémur exposé à l’aide de la pince à pansement incurvée et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour couper le fémur à partir du bas de l’os. Ensuite, placez le fémur dans du PBS.

Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 18 pour percer un trou dans un tube de microcentrifugation de 0,5 millilitre et placez les deux os dans le tube avec les extrémités ouvertes des os vers le bas dans le trou. Placez le tube de 0,5 millilitre dans un tube de microcentrifugation de 1,7 millilitre et faites tourner les tubes à double couche dans une microcentrifugeuse. À la fin de la centrifugation, confirmez que la moelle osseuse a été extraite vers le fond du tube.