Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 4:57 min • April 30th, 2023
- Les facteurs de transcription sont des protéines qui se lient à un site spécifique de l’ADN pour réguler l’expression des gènes. Des erreurs dans les facteurs de transcription modifient cette activité, entraînant une surexpression des gènes, ce qui provoque le cancer. Pour comprendre le rôle des facteurs de transcription et de la régulation des gènes, nous pouvons effectuer un test d’immunoprécipitation de la chromatine ou CHIP, et le cisaillement de la chromatine est une étape importante dans le flux de travail CHIP.
Pour le cisaillement de la chromatine, stabilisez le complexe ADN-protéine en ajoutant du formaldéhyde. Le formaldéhyde réticule les protéines à la séquence d’ADN associée en formant des liaisons covalentes. Ensuite, utilisez un tampon de lyse approprié pour lyser les cellules afin de libérer la chromatine contenant les complexes ADN-protéines réticulés et centrifugez. Cisailler la chromatine à l’aide de l’enzyme nucléase micrococcique. Cette enzyme clive la chromatine entre les nucléosomes et digère les extrémités libres de l’ADN. Centrifugez le mélange et récupérez le surnageant.
Chargez le surnageant sur du gel d’agarose TBE pour analyser la taille appropriée des
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