Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 4:41 min • April 30th, 2023
- c-Kit, ou CD117, est un récepteur transmembranaire de la tyrosine kinase exprimé par les cellules souches hématopoïétiques ou progénitrices présentes dans la moelle osseuse et le sang. C’est aussi un marqueur pour la détection de la leucémie myéloïde aiguë.
Pour isoler les cellules positives au c-Kit, prélevez des os de jambe murins et écrasez-les pour libérer la moelle de l’intérieur. Filtrez la suspension de moelle osseuse pour éliminer les fragments d’os. Superposer le filtrat contenant les cellules de la moelle osseuse sur un milieu à gradient de densité et centrifuger pour séparer les cellules mononucléées des autres fractions.
Collectez la couche trouble de cellules mononucléées dans un tube contenant des microbilles conjuguées à des anticorps de souris anti-CD117. Incuber pour que les complexes anticorps-billes se lient aux récepteurs CD117 sur les cellules c-Kit positives. Faites passer la suspension incubée à travers une colonne magnétique placée dans un champ magnétique. Toutes les cellules positives du c-Kit marquées avec les microbilles magnétiques restent dans la colonne, tandis que les cellules non marquées passent à travers.
Retirez la colonne du champ magnétique e
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