Transduction à médiation rétrovirale : une méthode pour introduire un gène cible dans des cellules cancéreuses

- Les rétrovirus sont des virus à ARN qui se répliquent en utilisant la transcriptase inverse pour convertir leur génome d’ARN en ADN double brin et s’intégrer de façon permanente dans le génome de l’hôte. Les nouvelles particules virales sortent de la cellule et peuvent infecter d’autres cellules. La thérapie génique anticancéreuse utilise des vecteurs rétroviraux pour introduire des gènes thérapeutiques dans les cellules cibles via une technique appelée transduction pour réguler à la baisse le gène muté ou éliminer les cellules.

Pour obtenir des vecteurs rétroviraux à titre élevé, transfectez les cellules HEK 293 avec un mélange de transfection contenant le plasmide rétroviral souhaité, le plasmide d’emballage et un agent de transfection approprié. Incuber les cellules. L’agent transfecteur facilite l’administration des deux plasmides dans les cellules.

Le plasmide rétroviral code le génome viral avec le gène cible, tandis que le plasmide d’emballage code pour les protéines de l’enveloppe virale. La machinerie cellulaire des cellules d'emballage forme des particules rétrovirales et les libère dans le milieu. Prélever le surnageant viral et centrifuger pour prélever les cellules.