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Recherche sur le cancer
0 vues • 3:31 min • April 30th, 2023
- Parfois, une cellule souche ou progénitrice subit des mutations, donnant naissance à une cellule souche leucémique. Dans ces cellules, certaines protéines sont régulées à la hausse, et l'utilisation de composés anticancéreux contre ces protéines peut aider à contrôler la croissance des cellules. L’effet de ces composés anticancéreux peut être analysé à l’aide d’un test CFU en surveillant le nombre et la taille des colonies formées.
Commencez par prélever des cellules progénitrices d’une souris leucémique et les diluer dans un milieu de culture approprié. Ajoutez cette suspension cellulaire avec le composé anticancéreux approprié à de la méthylcellulose contenant des cytokines spécifiques à la souris et versez-la dans une boîte de Pétri. Incuber ce mélange jusqu’à ce que les colonies apparaissent. La méthylcellulose est une matrice semi-solide chimiquement inerte qui empêche la migration cellulaire tandis que les cytokines stimulent les cellules progénitrices à se différencier et à former des colonies contenant une descendance reconnaissable.
Ensuite, colorez les colonies à l’aide de chlorure d’iodonitrotétrazolium, ou INT, et incubez pendant la nuit jusqu’à ce que les colonies deviennent brun rougeâtre foncé. Les enzymes mitochondriales réduisent l’INT de couleur jaune en colorant formazan de couleur brun rougeâtre. Enfin, identifiez et comptez les colonies présentes sur la plaque. Dans le protocole suivant, nous effectuerons un test UFC pour tester l’effet des composés anticancéreux sur les cellules YFP-positives.
- Tout d’abord, décongelez la méthylcellulose avec des cytokines pour souris à température ambiante. Ensuite, aliquote 3 millilitres de méthylcellulose dans un tube FACS. Ajoutez 100 microlitres de suspension cellulaire avec les inhibiteurs appropriés à 3 millilitres de méthylcellulose. Ensuite, faites tourbillonner la suspension à fond pendant 10 à 30 secondes.
Une fois que la plupart des bulles d’air se sont échappées, utilisez une seringue de 1 millilitre pour plaquer 1 millilitre de média dans trois plaques répétées. Placez les assiettes dans une grande boîte de Pétri avec une boîte ouverte contenant de l’eau stérile. Couvrez ensuite la grande boîte de Pétri et incubez les cellules à 37 degrés Celsius.
Préparez la coloration au chlorure d’iodonitrotétrazolium en dissolvant 10 milligrammes de chlorure d’iodonitrotétrazolium dans 10 millilitres d’eau. Filtre : stérilisez la solution de coloration à l’aide d’une seringue Luer-Lok équipée d’un filtre de 0,2 micromètre.
Dans le capot de culture tissulaire, ajoutez 100 microlitres de la solution de coloration goutte à goutte autour de la plaque CFU. Ensuite, incubez les plaques pendant la nuit à 37 degrés Celsius dans un incubateur de culture cellulaire. Enfin, une fois que les colonies ont pris une couleur rouge-brun foncé, utilisez un fond blanc dans la hotte de culture de tissus stériles pour prendre des photos de la plaque CFU colorée.