Métabolisme extracellulaire des purines : un test basé sur la HPLC pour mesurer la génération d’adénosine et le métabolisme dans les cellules leucémiques

- L’adénosine, un nucléoside purique présent en concentrations nominales dans l’espace extracellulaire, aide à contrôler la prolifération cellulaire dans des conditions physiologiques. Dans des conditions pathologiques comme la leucémie, la concentration extracellulaire d’adénosine augmente et inhibe les réponses immunitaires contre les cellules cancéreuses. L’accumulation d’adénosine résulte soit de la déphosphorylation des nucléotides ATP ou ADP, soit d’une dégradation altérée de l’adénosine en nucléoside d’inosine.

Pour mesurer la génération et la consommation d’adénosine, cultivez des cellules cancéreuses en présence d’un substrat nucléotidique. L’activité métabolique de l’adénosine des cellules détermine les concentrations des différentes molécules de purine présentes dans la culture. Centrifugeuse pour éliminer les cellules et obtenir des molécules de purine dans le surnageant.

Pour séparer et quantifier les purines, transférez l’échantillon dans des flacons appropriés. Chargez-les dans une colonne de chromatographie liquide à haute performance en phase inversée, ou RP-HPLC, contenant une phase stationnaire immobilisée avec des ligands hydrophobes. En passant à travers la col