Dosage de la population latérale : une méthode pour isoler une population latérale de cellules tumorales du poisson-zèbre

- Le traitement chimiothérapeutique des tumeurs cible généralement les cellules hautement prolifératives, laissant derrière eux un petit sous-ensemble de la population de cellules souches, conduisant à la récapitulation de la tumeur. Ces cellules souches sont appelées la population latérale. Étant donné que la population latérale manque de marqueurs cellulaires spécifiques, nous utilisons un test d’efflux de colorant pour les isoler des autres cellules tumorales.

Pour commencer, ajoutez le colorant Hoechst aux cellules tumorales isolées du poisson-zèbre. Hoechst pénètre dans le noyau et se lie à la région riche en A-T dans le sillon mineur de l’ADN. La population latérale des cellules a une concentration plus élevée de transporteurs ABC à la surface, ce qui entraîne l'efflux rapide du colorant à l'extérieur de la cellule, affichant une faible fluorescence.

Prenez un autre flacon de cellules tumorales traitées à Hoesct et ajoutez-y du vérapamil. Ce flacon agit comme un contrôle, car le vérapamil bloque les transporteurs ABC, ce qui entraîne une réduction de l’efflux de hoechst, augmentant ainsi la fluorescence dans la population latérale.

Incuber les cellules de contrôle et d’échant