Détection des ROS avec coloration DCFH-DA : mesure des ROS totaux dans les lignées cellulaires du cancer colorectal

- Les espèces réactives de l’oxygène sont produites principalement à partir des mitochondries lorsque des électrons s’échappent de la chaîne de transport d’électrons. Ces électrons se combinent avec l’oxygène moléculaire, donnant naissance à diverses espèces réactives de l’oxygène, ou ROS. Dans les cellules cancéreuses, il y a surproduction d’espèces réactives de l’oxygène. Ces molécules ROS hautement réactives peuvent endommager par oxydation les membranes, les protéines et l’ADN à l’intérieur de la cellule.

L’augmentation des niveaux de ROS endommage l’ADN, entraînant l’activation d’une voie de signalisation oncogénique provoquant la progression du cancer. Par conséquent, il est essentiel de détecter les niveaux d’espèces réactives de l’oxygène produites par les cellules cancéreuses.

Commencez par prélever des cellules cancéreuses du cancer colorectal humain dans un milieu de culture approprié. Ensuite, ensemencez ces cellules dans une plaque multipuits et ajoutez une solution DCFH-DA. Incuber la plaque pendant la durée souhaitée. DCFH-DA traverse la membrane cellulaire. Une fois à l’intérieur de la cellule, DCFH-DA se transforme en DCFH en présence d’une enzyme estérase cellulai