Extraction de miARN circulants : une méthode pour isoler des miARN à partir d’échantillons de plasma par extraction organique et enrichissement de petits ARN

- Les microARN ou miARN sont de petits ARN non codants qui régulent l’expression des gènes en dégradant l’ARNm ou en bloquant sa traduction en protéines fonctionnelles. Les miARN circulants sont des biomarqueurs potentiels du cancer et sont extractibles des fluides corporels comme le plasma. Pour commencer, mélangez le plasma avec une solution dénaturante qui homogénéise simultanément l’échantillon et inhibe les ribonucléases dégradant l’ARN.

Traiter avec du phénol-chloroforme acide et centrifuger pour séparer l’échantillon en deux phases, une phase organique inférieure contenant de l’ADN et des protéines, et une phase aqueuse supérieure contenant de l’ARN. Récupérer la phase aqueuse. Ajoutez de l’éthanol absolu pour précipiter l’ARN de la solution.

Amener la concentration d’éthanol de l’échantillon à 25 % pour créer une première condition propice à une grande séparation de l’ARN. Transférez le mélange dans une cartouche filtrante pré-assemblée et centrifugez. Les gros ARN s’immobilisent sélectivement sur le filtre, tandis que les plus petits miARN s’accumulent dans le filtrat.

Par la suite, augmentez la concentration d’éthanol à 55 % pour favoriser l’isolement des miARN. Transfére