Marquage des cellules organoïdes du CRC : une méthode pour générer des cellules organoïdes de cancer colorectal transduites par le lentivirus GFP

- Les organoïdes sont des constructions cellulaires in vitro tridimensionnelles qui s’auto-organisent pour imiter les principales caractéristiques tissulaires de leur organe d’origine. Pour commencer le marquage, traitez les organoïdes récoltés avec un cocktail d’enzymes protéolytiques et collagénolytiques pour dissocier les cellules en suspension. Centrifugeuse pour séparer les cellules du surnageant contenant des enzymes. Jetez le surnageant. Dissoudre la pastille cellulaire à l’aide d’un milieu contenant des vecteurs lentiviraux. Ces virus recombinants portent la séquence codante d’une protéine fluorescente verte ou GFP.

Les virus fusionnent avec les cellules et libèrent leur matériel génétique et certaines enzymes virales dans le cytoplasme. La transcriptase inverse virale synthétise l'ADN viral complémentaire qui se déplace dans le noyau de l'hôte. L’intégrase virale aide à incorporer l’ADN viral contenant la séquence GFP dans le génome de l’hôte. Cultivez ces cellules transduites dans une matrice extracellulaire ou une plaque de culture recouverte d’ECM. Aspirez le fluide et centrifugez-le pour recueillir toutes les cellules non attachées. Remettez les cellules en suspension