Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 2:57 min • April 30th, 2023
- Commencez par une culture de protéine fluorescente verte, ou GFP, exprimant les organoïdes du cancer colorectal. Récoltez les organoïdes. Traiter avec une solution enzymatique de décollement cellulaire pour dissocier les organoïdes en une suspension unicellulaire. Centrifugeuse pour séparer le surnageant contenant des enzymes. Retirez le surnageant. Remettre en suspension les cellules cancéreuses colorectales exprimant la GFP à l’aide d’un milieu artificiel contenant une matrice extracellulaire. Chargez la suspension cellulaire dans une seringue et maintenez-la sur de la glace pour éviter la solidification de la matrice à température ambiante.
Ensuite, préparez une souris anesthésiée en position couchée. Retirez doucement la muqueuse du rectum par l’ouverture anale. Maintenant, injectez la suspension de cellules cancéreuses exprimant la GFP préparée dans la couche sous-muqueuse rectale contenant le réseau de vaisseaux sanguins. Laissez la souris récupérer.
En quelques jours, une tumeur primaire exprimant la GFP se développe au site d’injection. Avec les métastases spontanées, ces cellules tumorales se détachent et entrent dans la circulation. Finalement, les cellules extravasent dans des organes distants et prolifèrent pour former des tumeurs métastatiques positives à la GFP. Dans le protocole suivant, nous montrerons la génération d’un modèle murin de métastases spontanées du cancer colorectal en injectant orthotopiquement des cellules organoïdes colorectales exprimant la GFP.
- Établir un modèle murin de métastases spontanées de xénogreffes tumorales dérivées de patients atteints de CCR, dissocier les organoïdes marqués à la GFP comme démontré et diluer les suspensions de cellules tumorales uniques à 5 fois 10 pour cinq cellules tumorales par 50 microlitres de PBS, complétées par une concentration de matrice extracellulaire artificielle de 50 %. Chargez 50 microlitres de cellules par souris dans une seringue équipée d’une aiguille de calibre 22 et placez les cellules tumorales sur de la glace.
Ensuite, confirmez une absence de réponse au pincement de l’orteil et placez la première souris NOG anesthésiée en position couchée sur la paillasse du laboratoire. À l’aide d’une pince à épiler stérile, retirez doucement la muqueuse rectale de l’anus et injectez immédiatement les cellules tumorales dans la sous-muqueuse rectale.