Dosage de la phosphatase dans les cellules du CRC : une méthode pour examiner l’état de phosphorylation de la protéine tau dans les cellules cancéreuses colorectales

- La protéine tau se localise en périphérie du nucléole dans les cellules cancéreuses colorectales et aide à maintenir la structure nucléolaire. La plupart du temps, ces cellules expriment la protéine tau hyperphosphorylée, ce qui entraîne une résistance aux médicaments. Ainsi, nous analysons les niveaux de phosphorylation de la protéine tau en effectuant un dosage de la phosphatase.

Commencez par prendre le lysat cellulaire contenant la protéine totale des cellules cancéreuses colorectales humaines dans deux flacons étiquetés comme test et contrôle. Traitez l’échantillon d’essai avec l’enzyme phosphatase alcaline. La phosphatase alcaline élimine les groupes phosphate de tau, tandis que le flacon de contrôle conserve la protéine tau phosphorylée.

Ensuite, analysez l’échantillon et le tau de contrôle sur un gel de polyacrylamide pour séparer les protéines. La protéine tau phosphorylée se déplace plus lentement sur le gel que la protéine tau non phosphorylée. Électrolotter l’échantillon de protéine sur une membrane appropriée et ajouter des anticorps primaires correspondant à la fois à la protéine tau phosphorylée et à la protéine tau normale.

Incuber le tampon pendant la nuit. Trait