Dosage de la liaison des microtubules dans les cellules CRC : méthode d’examen de la protéine tau de liaison des microtubules dans les cellules cancéreuses colorectales

- Tau est une protéine associée aux microtubules impliquée dans la stabilisation et l’assemblage des microtubules. De nombreuses cellules cancéreuses expriment une protéine tau hyperphosphorylée, qui ne parvient pas à maintenir une liaison bien organisée des microtubules. Pour étudier l’interaction entre la protéine tau et les microtubules, ajoutez du lysat de cellules cancéreuses contenant la protéine tau et une solution de travail pour les microtubules dans un tube à microtubules.

Les protéines tau non phosphorylées présentes dans le lysat cellulaire se lient aux microtubules. Maintenant, ajoutez la quantité souhaitée de tampon PEM dans le tube pour stabiliser l’activité de la tubuline, une protéine qui polymérise en filaments pour former des microtubules. Incuber le mélange pendant la durée souhaitée.

Centrifugez le mélange pour granuler la protéine liée aux microtubules. La protéine non liée reste dans le surnageant. Transférez le surnageant dans un tube frais et remettez la pastille en suspension dans un tampon approprié. Ajoutez un tampon de chargement de gel à la suspension de pastilles remise en suspension et analysez les échantillons sur un gel de polyacrylamide pour sépar