Microdissection laser : une technique pour isoler les cellules envahissantes du cancer colorectal à partir d’un modèle de culture organotypique 3D

- Les modèles organotypiques 3D du cancer colorectal sont des cultures in vitro conçues pour imiter les microenvironnements tumoraux in vivo. La culture contient souvent des cellules stromales, comme des fibroblastes, co-cultivées avec des cellules épithéliales du cancer colorectal, dans un microenvironnement de matrice extracellulaire approprié.

Dans les cultures établies, les cellules tumorales à potentiel métastatique envahissent la matrice extracellulaire. Pour isoler ces cellules envahissantes, il faut d’abord traiter le modèle organotypique avec du formaldéhyde pour fixer les cellules et la matrice extracellulaire. Incuber avec de l’alcool pour déshydrater l’échantillon.

Ensuite, incorporez-le dans de la cire de paraffine liquide pour générer un bloc tissulaire. À l’aide d’un ultramicrotome, on obtient des tronçons finement tranchés. Montez les sections sur une diapositive en verre appropriée.

Ajouter du xylène pour déparaffiniser les sections. Séquentiellement, incuber les sections à des concentrations décroissantes d’éthanol pour réhydrater les échantillons.

Traiter avec Cresyl Violet pour colorer et différencier les cellules cancéreuses colorectales du microenvironnement.