Dosage de la cytométrie de traction : une méthode pour quantifier la force de traction exercée par les cellules cancéreuses sur l’ECM

- Les cellules génèrent des forces mécaniques qui agissent sur une matrice extracellulaire. Cette force est appelée force de traction. Les cellules exercent des forces de traction pour effectuer diverses tâches telles que la migration et la prolifération.

Les cellules cancéreuses métastatiques exercent des forces de traction plus importantes que les cellules saines ; par conséquent, nous effectuons un test de cytométrie de traction pour mesurer les forces de traction exercées par les cellules sur des substrats élastiques. Commencez par ensemencer la quantité souhaitée de cellules cancéreuses du côlon sur un hydrogel de polyacrylamide, un gel qui imite la MEC in vitro. Le gel comprend des protéines de fibronectine, qui aident les cellules à adhérer à la surface, et des billes fluorescentes, qui agissent comme un marqueur des changements de position.

Incuber les cellules pendant la période souhaitée. Les cellules adhèrent au gel et exercent la force de traction, ce qui provoque le déplacement des billes fluorescentes. Maintenant, placez la plaque sous un microscope fluorescent et prenez une image des billes fluorescentes déplacées. Ensuite, ajoutez la quantité souhaitée de trypsine dans la plaque pour détacher les cellules et analysez la force de traction exercée par les cellules à l’aide d’un logiciel approprié. Dans le protocole suivant, nous effectuerons un test de microscopie à force de traction pour analyser la traction cellulaire des cellules cancéreuses du côlon humain.

- Pour effectuer le test de microscopie de force de traction, faites d’abord chauffer une solution de trypsine-EDTA 10 % de SDS à 0,25 % à 37 degrés Celsius dans un bain-marie pendant 10 minutes avant le début de l’expérience de traction. Retirer un gel à la fois de l’incubateur de culture cellulaire et le placer sur la platine du microscope. Après avoir trouvé une seule cellule dans le champ de vision, retirez le couvercle de la boîte de Pétri et prenez une image en contraste de phase de la cellule.

Ensuite, passez le mode d’imagerie en fluorescence et sélectionnez le filtre approprié. Ne déplacez pas la platine du microscope ou l'échantillon pendant ce temps. Ensuite, prenez une image des billes fluorescentes déplacées par la traction cellulaire. Maintenant, ajoutez 1 millilitre de solution de trypsine SDS dans la boîte de Pétri pour détacher la cellule du gel. Prenez une image de référence des perles après avoir retiré la cellule.