Essai d’organisation du cytosquelette et de l’adhésion focale : une méthode basée sur l’immunofluorescence pour étudier l’adhésion cellulaire et la propagation sur des substrats

- La morphologie du substrat influence grandement le comportement et les réponses métastatiques des cellules cancéreuses. Un réseau dynamique de cytosquelette d’actine fournit un soutien structurel aux cellules et médie le mouvement cellulaire. De grands complexes protéiques associés à la membrane, appelés adhérences focales, relient le cytosquelette à la matrice extracellulaire, facilitant ainsi la propagation cellulaire.

Pour commencer la coloration, prenez une culture de cellules cancéreuses et traitez-les avec du paraformaldéhyde pour fixer et perméabiliser les cellules. Maintenant, incubez les cellules avec un réactif d’amplification du signal contenant des protéines pour préparer les cellules à réduire la coloration de fond. Ajoutez des anticorps primaires anti-vinculine qui se lient à la vinculine, l’une des protéines du complexe d’adhésion focale.

Ensuite, incubez l’échantillon avec un anticorps secondaire conjugué à un colorant fluorescent ciblant l’anticorps primaire. Enfin, traitez les cellules avec des conjugués de phalloïdine marqués fluorescents qui se lient sélectivement aux filaments d’actine du cytosquelette. Observez les cellules à l’aide d’un microscope confocal