Culture rapide de mélanocytes et de fibroblastes murins primaires : isolement des mélanocytes et des fibroblastes à partir d’un échantillon de peau murine entière

- La peau est constituée de diverses cellules qui peuplent ses différentes couches. Les mélanocytes, les cellules productrices de mélanine, se localisent à la jonction épidermique-dermique, tandis que les fibroblastes, les cellules génératrices de tissu conjonctif, résident dans le derme.

Pour isoler rapidement les mélanocytes et les fibroblastes, commencez par prélever le tronc d’un bébé souris euthanasié. Coupez la peau ventralement sur toute la longueur du tronc. Retirez la peau contenant la couche épidermique et dermique et coupez le tissu en petits morceaux.

Maintenant, traitez avec un tampon de digestion contenant des enzymes trypsine et collagénase qui dégradent la matrice extracellulaire, libérant les cellules en suspension. Centrifuger pour granuler les cellules et jeter le surnageant. Remettez les cellules en suspension dans un milieu mélanocytaire et transférez la suspension dans une plaque multipuits.

Pendant la culture, la plupart des fibroblastes adhèrent au fond du puits, tandis que les mélanocytes et autres cellules épidermiques restent en suspension. Aspirez les cellules en suspension et ajoutez un milieu spécifique aux fibroblastes à la culture de fibroblastes pou