Modification génétique de kératinocytes humains primaires : une méthode de manipulation génétique des kératinocytes à l’aide de rétrovirus recombinants

- Les kératinocytes sont le type de cellule proéminent présent dans l’épiderme ou la couche la plus externe de la peau. Pour modifier génétiquement les kératinocytes, commencez par une culture de cellules phénix d’emballage rétroviral. Par la suite, ajoutez un mélange contenant des vecteurs rétroviraux porteurs du gène d’intérêt et un réactif de transfection. Incuber la plaque pendant la durée souhaitée.

Le réactif de transfection facilite l’administration du matériel génétique viral dans les cellules d’emballage. Ces cellules spécialement conçues codent pour les protéines nécessaires à la production de capside rétrovirale et favorisent l’emballage de l’ARN du vecteur rétroviral porteur du gène d’intérêt. Lors de l’emballage, les virus matures sortent des cellules dans le milieu. Maintenant, transférez le milieu en suspension virale dans une boîte de culture fraîche contenant des kératinocytes primaires. Augmentez la culture avec une solution de polymère cationique souhaitée.

Le polymère cationique neutralise les charges négatives sur les membranes virales et kératinocytaires, augmentant ainsi l’efficacité de la fusion virale avec la surface cellulaire. Lors de la fusion, le virus