Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 6:44 min • April 30th, 2023
- L’essai de formation de colonies détermine la capacité des cellules individuelles à proliférer et à former des colonies. Commencer par une excision de la peau dorsale de la souris dans une plaque de culture. Grattez le tissu sous-cutané et la graisse de la face ventrale de la peau. Traitez le tissu avec une solution de digestion. Les enzymes protéolytiques présentes dans la solution dégradent la matrice extracellulaire, induisant la dissociation des cellules épidermiques.
Grattez doucement la couche épidermique pour libérer les cellules et les poils dissociants dans un milieu de récolte. Filtrez la suspension à travers une passoire appropriée pour piéger les poils ou tout débris et obtenez une suspension unicellulaire de cellules épidermiques. Transférez le volume souhaité de cette suspension cellulaire dans une plaque recouverte de collagène contenant une couche adhérente de cellules nourricières arrêtées par la croissance. Complétez avec un milieu adapté qui favorise la survie des kératinocytes.
Pendant la culture, les kératinocytes se fixent à la couche nourricière. De plus, ces cellules nourricières sécrètent des facteurs de croissance et synthétisent des protéines de la matr
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