Dosage de la dose érythémateuse minimale : méthode de mesure de la sensibilité aux UV dans des modèles murins

- Les mélanocytes produisent un pigment foncé appelé eumélanine qui absorbe les rayons UV nocifs, protégeant ainsi la peau. Pour mesurer la sensibilité aux UV, commencez par prendre un modèle de souris anesthésiée. Préparez la souris en enlevant sa fourrure dorsale pour exposer la couche épidermique. Fixez un morceau de ruban adhésif anti-UV portant un nombre défini de trous sur la peau exposée. Fixez de petits rubans amovibles sur tous les trous, sauf un, pour masquer l’ouverture.

Maintenant, soumettez la souris aux rayons UV pendant la durée souhaitée. Pendant la période d’exposition, démasquez les trous restants séquentiellement à des points temporels prédéterminés. Cela permet aux plaques cutanées exposées successivement de recevoir des doses décroissantes de rayons UV. Les trous permettent la pénétration localisée des rayons UV dans l'épiderme de la souris.

Lors de l’exposition, les cellules de l’épiderme libèrent des molécules pro-inflammatoires. Ces molécules se diffusent vers le derme et dilatent les vaisseaux sanguins dermiques provoquant un érythème ou des rougeurs cutanées. Par la suite, les leucocytes s’infiltrent dans le derme et provoquent un œdème ou un gonflement de la zone exposée.

Au point final expérimental, arrêtez le rayonnement et retirez le ruban adhésif pour observer l’érythème et l’œdème. Dans le protocole suivant, nous mesurerons la sensibilité aux UV dans un modèle de souris humanisée traitée avec de la forskoline - un médicament produisant de la mélanine - en déterminant la dose érythémateuse minimale.

- Pour déterminer la dose érythémateuse minimale, ou MED, chaque animal sera exposé à une variété de doses UV. Commencez par préparer un morceau de ruban adhésif anti-UV, à l’aide d’une perforatrice robuste avec une découpe circulaire de 1 centimètre carré pour percer des trous dans le ruban. Sur chaque trou du ruban, appliquez un petit morceau de ruban adhésif facilement détachable qui peut être retiré pour l’exposition aux UV. Placez le ruban adhésif sur la surface dorsale de la souris anesthésiée.

Si les yeux de l'animal sont ouverts, appliquez des larmes artificielles pour éviter les blessures dues au dessèchement et à l'exposition aux UV. Allumez la source UV composée de deux lampes UVB avec une puissance de crête de 313 nanomètres et une portée de 280 à 370 nanomètres. Laissez la lampe s’équilibrer à une sortie UV constante avant d’utiliser un photomètre UV avec le capteur UVB pour vérifier la sortie.

Sur la base du taux de transmission des UV mesuré par le photomètre UV, calculez le temps d’exposition aux UV pour chaque dose souhaitée. Par exemple, la sortie UVB de votre lampe mesure 2,4 milliwatts par centimètre carré. Par conséquent, pour administrer 5 kilojoules par mètre carré, la peau devrait être exposée à 208 secondes de rayonnement UVB, comme calculé ici.

Ensuite, placez la surface ventrale de l'animal sous sédatif pour assurer une exposition uniforme aux UV. Pour administrer la dose de rayonnement choisie, retirez séquentiellement les petits morceaux de ruban adhésif qui recouvrent les trous au moment opportun.

Par exemple, si 40 kilojoules par mètre carré est la dose la plus importante, la souris serait sous la lampe pendant 27 minutes et 47 secondes et le trou pour cette dose serait exposé dès le début. Cependant, pour la condition de 5 kilojoules par mètre carré, le ruban serait retiré avec 208 secondes de temps d’exposition restantes. Après l’exposition aux UV, retirez soigneusement le ruban adhésif et placez les animaux dans un endroit chaud et calme pour qu’ils se remettent de l’anesthésie avant de les remettre dans leurs cages.

La valeur de la dose érythémateuse minimale, ou MED, correspond à la dose minimale d’UV qui provoque une inflammation définie par un érythème et/ou un œdème de l’ensemble du cercle de peau exposé. Surveillez la souris pendant 24 à 48 heures pour rechercher des zones discrètes d’érythème ou d’œdème dans les zones exposées aux UV.

Parfois, le chaume de fourrure résiduel brouille l’interprétation du test MED en masquant un érythème cutané ou un œdème sous-jacent. Mouiller la peau avec de l’éthanol à 70 % rend la peau beaucoup plus interprétable. Documentez photographiquement les traces de peau, puis renvoyez les souris à l’animalerie.