Name: Molécules simples à limagerie du transport nucléaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-09T17:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 13 s
Description: Découvrez la microscopie de molécules uniques pour visualiser le transport nucléaire à travers les complexes du pore nucléaire dans les cellules HeLa. Cette méthode permet d'analyser la dynamique moléculaire avec une résolution nanométrique.

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Ce projet a été soutenu par la recherche de renforcement des capacités de subvention (Bowling Green State University).

<ol><li>Ma, J., Yang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Molecule+Snapshots+of+Three-Dimensional+Distribution+of+Transient+Interactions+in+Nuclear+Pore+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Single Molecule Snapshots of Three-Dimensional Distribution of Transient Interactions in Nuclear Pore Complex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Sarma, A., Goryaynov, A., Yang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Molecule+Imaging+of+the+Calcium-Regulated+Nuclear+Pore+Permeability%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Single Molecule Imaging of the Calcium-Regulated Nuclear Pore Permeability.</a> , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Yang, W., Musser, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+single+molecules+transiting+through+nuclear+pore+complexes+using+narrow-field+epifluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Visualizing single molecules transiting through nuclear pore complexes using narrow-field epifluorescence microscopy.</a> Methods. 39, 316-328 (2006).</li>
<li>Yang, W., Gelles, J., Musser, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+single-molecule+translocation+through+nuclear+pore+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Imaging of single-molecule translocation through nuclear pore complexes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 12887-12892 (2004).</li>
</ol>

Des précautions doivent être prises pour assurer une bonne colocalisation des molécules NE et unique au cours de l&#39;expérience. Il est également important de fournir un rapport signal bruit de haute, surtout lorsque le signal est faible en raison de mauvais étiquetage ou de photoblanchiment. Précision de localisation est limitée par le bruit de fond (découlant de sortir du flou de fluorescence, bruit de lecture du CCD, sombre facteurs actuels et d&#39;autres).

molécules simples à l&#39;imagerie du transport nucléaire

Single-Molecule Imaging of Nuclear Transport

L&#39;utilité des approches molécule unique microscopie par fluorescence a été prouvée pour être d&#39;un grand résultat dans la compréhension des réactions biologiques au cours de la dernière décennie. L&#39;enquête sur les interactions moléculaires à haute résolution spatiale et temporelle profonde au sein des cellules est resté difficile en raison de la faiblesse inhérente des signaux provenant de molécules individuelles. Des travaux récents par Yang et al. démontré que la microscopie à champ étroit épifluorescence permet la visualisation de transport nucléocytoplasmique au niveau molécule unique. Par l&#39;approche seule molécule, cinétique importante, comme le temps de transport nucléaire et l&#39;efficacité, pour les molécules de fret signal dépendantes et indépendantes ont été obtenues. Ici, nous avons décrit un protocole pour l&#39;approche méthodologique avec une meilleure résolution spatio-temporelle des nm et 12 ms 0.4. L&#39;amélioration de la résolution nous a permis de capture de transitoires de transport actifs et des événements de diffusion passive à travers les complexes des pores nucléaires (NPC) en semi-intactes les cellules. Nous prévoyons que cette méthode soit utilisée dans l&#39;élucidation d&#39;autres événements de liaison et le trafic intérieur des cellules.

Microscopie à molécule unique Approche fourni de nouvelles connaissances sur le transport nucléaire.

Molécules simples à l&#39;imagerie du transport nucléaire

L'utilité des approches de microscopie de fluorescence à molécule unique s'est avérée d'un grand secours pour comprendre les réactions biologiques sur le...

L'enveloppe nucléaire de la cellule contient environ 2000 complexes nucléaires PO qui permettent le transport de molécules hydrosolubles telles que l'ARN, les ribosomes, certaines protéines, les glucides et les molécules de signalisation. En ajoutant des molécules de cargaison marquées à des cellules perméables, il est possible de visualiser par microscopie à fluorescence le déplacement de molécules individuelles à travers le pore nucléaire. Des images en prise de vue instantanée sont nécessaires pour déterminer la localisation ainsi que les caractéristiques spatiotemporelles telles que le temps de transport, l'efficacité d'importation et d'exportation, et la fréquence d'entrée. Bonjour, je suis Alex ov, étudiant en doctorat au laboratoire de microscopie de molécules uniques du Département de biologie de l'Université d'État de Bowling Green.Je suis Asha P Shema, étudiante en master, également du laboratoire de microscopie de molécules uniques. Je suis Juma. Je suis chercheur postdoctoral ici au laboratoire de microscopie de molécules uniques.Aujourd'hui, nous allons vous présenter une procédure d'imagerie de molécules uniques permettant d'observer le transport nucléaire à travers l

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Nous décrivons ici l'instrumentation et des méthodes pour la détection de molécules de protéine unique marqués par fluorescence qui interagissent avec une molécule d'ADN unique suspendu entre deux microsphères optiquement piégés.

La combinaison unique molécule manipulation et d&#39;imagerie pour l&#39;étude des interactions protéine-ADN

Nous décrivons une procédure pour la détection des éléments chimiques présents in situ dans les cellules humaines, mais aussi leur quantification in vitro . La méthode est bien adaptée à tout type de cellule et est particulièrement utile pour des analyses chimiques quantitatives dans des cellules individuelles après in vitro l’exposition nanoparticules d’oxyde métallique.

In Situ Détection et Quantification de la cellule unique de nanoparticules d’oxyde métallique à l’aide de l’analyse par microsonde nucléaire

Ce protocole décrit un procédé pour mesurer de façon sensible le taux de transport nucléocytoplasmique dans les cellules NSC-34 de type neurone moteur en quantifiant le changement en temps réel de l'importation nucléaire d'une protéine NLS-NES-GFP.

Essai pour mesurer le transport des nucléocytoplasmes en temps réel dans les cellules NSC-34 de type Neuron moteur

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Ici, nous illustrons comment microscopie photoactivation localisation seule molécule peut être effectuée sur le terminal de nerf moteur d’un live de Drosophila melanogaster troisième stade larve.

In Vivo Simple-molécule suivi du terminal de nerf moteur présynaptique Drosophila

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Les méthodes actuelles décrivent une approche non ratiométrique pour l’imagerie calcique sous-compartimentale à haute résolution in vivo chez Caenorhabditis elegans à l’aide d’indicateurs de calcium génétiquement codés facilement disponibles.

Imagerie subcellulaire de la manipulation neuronale du calcium in vivo

Ce protocole décrit comment mettre en place et effectuer efficacement des analyses automatisées de données d’imagerie de cellules vivantes obtenues à partir du suivi du transport nucléocytoplasmique via des outils optogénétiques.

Utilisation des outils d’optogénétique LEXY et LINuS et de l’analyse automatisée d’images pour quantifier la dynamique du transport nucléocytoplasmique dans les cellules vivantes

Ce protocole propose un flux de travail efficace pour l’imagerie microscopique de localisation à molécule unique des noyaux isolés d’Arabidopsis, utilisant une isolation, une fixation et un marquage optimisés pour obtenir une visualisation fiable à l’échelle nanométrique de la chromatine et de la polymérase ARN II. Cette approche peut être facilement adaptée à d’autres protéines associées à la chromatine ou à des modifications histoniques pour l’imagerie haute résolution.

Un protocole rationalisé pour la microscopie de localisation à molécule unique dans les noyaux d’Arabidopsis

Fonction de la protéine membranaire est réglementé par la composition lipidique des cellules à membrane. Cette vidéo détaille-article comment la forme d'un patch correctif en utilisant des électrodes bicouche, ainsi que la façon d'utiliser les canaux de gramicidine en tant que reporters des propriétés des membranes modifiées.

Méthodes Single Molecule pour surveiller les changements dans les propriétés élastique bicouche

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Molécules simples à l'imagerie du transport nucléaire

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