Détection de protéines virales dans le tissu cérébral de souris infectées par le virus de la rage

Prélever des coupes cérébrales fixes sur des souris infectées par le virus de la rage intracérébrale à des intervalles post-mortem définis.

Le virus infecte les neurones pyramidaux du cortex cérébral et les protéines virales exprimées se localisent dans des structures granulaires intracytoplasmiques appelées corps d’inclusion.

Traitez les sections avec du chlorure d’ammonium pour neutraliser les groupes réactifs induits par la fixation et minimiser les taches de fond.

Immergez les sections dans du peroxyde d’hydrogène pour inactiver la peroxydase endogène et réduire les signaux non spécifiques.

Appliquez une solution bloquante contenant un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires et masquer les sites de liaison non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires spécifiques aux protéines virales.

Laver et incuber avec des anticorps secondaires conjugués à la biotine qui se lient aux anticorps primaires.

Lavez à nouveau et introduisez l’avidine conjuguée à l’enzyme peroxydase, qui se lie à la biotine, suivie d’un substrat chromogène que l’enzyme convertit en un produit coloré.

Visualisez les corps d’inclusion immunoréactifs contenant des protéines virales à l’aide d’un microscope.

Avec l’augmentation du temps post-mortem, la dégradation neuronale et la disparition des corps d’inclusion deviennent évidentes.