Microscopie électronique à transmission de granules de lipofuscine dans les neurones

Commencez par du tissu cortical préfixé, où les neurones contiennent des granules de lipofuscine. Ces granules riches en lipides s’accumulent avec l’âge et sont associés à des conditions neuropathologiques.

Traitez les tissus avec du tétroxyde d’osmium pour stabiliser les structures cellulaires, y compris la lipofuscine.

Traitez le tissu avec des concentrations croissantes d’éthanol pour le déshydrater. Ensuite, intégrez-le dans de la résine et découpez des sections ultrafines pour révéler les structures neuronales.

Montez la section sur une grille en cuivre non revêtue.

Teignez la section avec de l’acétate d’uranyle, une tache de métal lourd.

Les ions uranyle interagissent avec les biomolécules cellulaires, notamment les lipides, les protéines et l’ADN.

Ensuite, colorez le tissu avec du citrate de plomb, qui interagit faiblement avec les ions uranyle pré-liés, améliorant le contraste avec l’arrière-plan.

Placez la tranche colorée sous un microscope électronique à transmission pour l’exposer à un faisceau d’électrons focalisé.

Les biomolécules colorées enrichies de colorants de métaux lourds dispersent fortement les électrons par rapport à l’arrière-plan.

Les granules de lipofuscin