Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 1:30 min • March 4th, 2025
Obtenez du tissu de moelle épinière fixé chimiquement à partir de souris induites par une démyélinisation auto-immune à des moments définis de la progression de la maladie.
La maladie déclenche l’attaque des protéines de myéline par des cellules immunitaires autoréactives, dégradant la gaine de myéline entourant les axones neuronaux.
Les cellules précurseurs des oligodendrocytes sont recrutées sur le site affecté, se transforment en oligodendrocytes et reforment la gaine de myéline.
Rincez le tissu avec un tampon pour éliminer l’excès de fixateur, puis traitez-le avec de l’osmium, qui se lie aux lipides de myéline et améliore le contraste pour l’imagerie.
Appliquez des colorants de métaux lourds qui se lient aux macromolécules et améliorent le contraste.
Déshydratez les tissus en augmentant les concentrations d’alcool. Prenez le tissu nauséabond dans la résine et obtenez des coupes ultrafines.
À l’aide de la microscopie électronique, mesurez l’épaisseur de la gaine de myéline pour classer les axones comme démyélinisants avec une gaine gonflée et plus épaisse, démyélinisés sans gaine ou remyélinisés avec une gaine mince.
Identifier les lésions axonales caractérisées par une réduction de l’espacement entre les neurofilaments et des mitochondries enflées ou une dégénérescence complète.
Analysez la progression des lésions axonales et de la réparation au fil du temps pour évaluer la progression de la maladie.