Analyse au microscope électronique des lésions de la myéline dans un modèle de lésion du nerf optique chez le rat

Prenez des sections de nerf optique fixe d’un rat témoin et d’un rat avec une lésion du nerf optique.

La section de contrôle présente des axones avec des gaines de myéline étroitement tassées contenant des couches concentriques de membrane plasmique. La section blessée présente une myéline décompactée avec de grands espaces.

Incuber avec un complexe osmium-ferrocyanure qui se lie aux lipides et améliore le contraste de la gaine de myéline.

Traiter avec du thiocarbohydrazide pour créer des sites de liaison supplémentaires pour l’osmium.

Réappliquez de l’osmium pour améliorer encore le contraste lipidique.

Tache avec des métaux lourds, qui se lient aux macromolécules et améliorent le contraste structurel.

Déshydrater en augmentant les concentrations d’alcool et rincer à l’acétone pour l’enrobage de résine.

Incorporez le tissu dans de la résine et enduisez-le d’or pour améliorer la qualité de l’image.

Utilisez la microscopie électronique à balayage en série pour découper et imager simultanément. Focalisez le faisceau d’électrons sur la surface et détectez les électrons rétrodiffusés pour générer des images.

Les gaines de myéline apparaissent sombres, tandis que les espaces à l’intérieur des gaines endommagées apparaissent plus clairs, ce qui permet de différencier la myéline normale de la myéline endommagée.