Détection immunohistologique d’agents pathogènes dans le tissu cérébral

Prenez un tissu cérébral humain fixé au formol et incorporé dans de la paraffine. Le tissu présente des microbes pathogènes présents à la fois à l’intérieur des cellules et à l’extérieur.

Lavez pour éliminer la paraffine, puis réhydratez le tissu en diminuant les concentrations d’alcool.

Chauffer avec un tampon acide pour briser les réticulations protéiques induites par le formol, démasquant ainsi les épitopes antigéniques sur les bactéries.

Incuber avec du chlorure d’ammonium pour neutraliser les groupes aldéhydes réactifs résiduels formés lors de la fixation, empêchant ainsi l’interaction non spécifique avec les anticorps.

Traiter avec un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires, facilitant la pénétration des anticorps.

Appliquez une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires qui ciblent les microbes extracellulaires et intracellulaires.

Appliquez des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires.

Ajoutez un colorant fluorescent de liaison à l’ADN pour colorer les noyaux.

Traiter avec un éliminateur d’autofluorescence pour éteindre la fluorescence des granules intracellulaires autofluorescents, en minimisant les signaux de fond.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, examinez le tissu pour confirmer la présence de microbes.