Détection de protéines tau phosphorylées dans des échantillons de cerveau de souris à l’aide de l’analyse par transfert Western

Commencez avec un tissu cérébral de souris dans un tampon d’extraction contenant des inhibiteurs de protéase et un détergent.

Homogénéiser le tissu pour libérer des protéines dans le tampon. Les inhibiteurs de la protéase bloquent l’activité de la protéase, empêchant la dégradation des protéines.

Centrifugez et collectez le surnageant avec les protéines.

Ajoutez un tampon de chargement contenant un détergent et un agent réducteur pour dénaturer la protéine.

Chargez les protéines du témoin et de l’échantillon dans un gel SDS-PAGE. Appliquez un champ électrique pour séparer les protéines en bandes distinctes.

Après l’électrophorèse, transférez les bandes de protéines sur une membrane.

Traitez la membrane avec un tampon contenant du lait écrémé pour bloquer les sites d’interaction non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires qui se lient spécifiquement aux protéines tau phosphorylées.

Laver et incuber avec des anticorps secondaires conjugués aux enzymes.

Ajoutez un substrat qui réagit avec l’enzyme pour produire un signal lumineux, confirmant les protéines tau phosphorylées.

Une bande lumineuse intense dans l’échantillon par rapport au témoin suggère une pathologie neurodégénérative.