Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 1:30 min • March 4th, 2025
Commencez par les protéines du LCR, y compris l’alpha-synucléine phosphorylée, un biomarqueur des maladies neurodégénératives.
Ajoutez un tampon de chargement contenant un détergent, un agent réducteur et un colorant de suivi.
Chauffez pour dénaturer les protéines, puis chargez-les dans un gel SDS-PAGE.
Effectuez une électrophorèse pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire en bandes distinctes.
Incuber le gel dans un tampon buvard avec agitation.
Ensuite, transférez par électro-transfert les bandes protéiques du gel sur la membrane.
Traitez la membrane avec un fixateur pour retenir la protéine sur la membrane, puis lavez.
Incuber avec une solution bloquante contenant des anticorps primaires et des inhibiteurs de la phosphatase pour maintenir la phosphorylation de l'alpha-synucléine.
Les anticorps interagissent exclusivement avec l’alpha-synucléine phosphorylée, et les réactifs bloquants bloquent les sites d’interaction non spécifiques, puis se lavent.
Introduisez des anticorps secondaires conjugués à des enzymes qui interagissent avec les anticorps primaires, puis lavez.
Ajoutez un substrat chimiluminescent, interagissant avec les enzymes et générant une chimiluminescence.
Une bande chimiluminescente confirme la présence d’alpha-synucléine phosphorylée.