Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 1:23 min • March 4th, 2025
Prenez une section réhydratée de tissu cérébral humain malade contenant des corps de Lewy.
Incuber avec une solution de peroxyde d’hydrogène pour inhiber les peroxydases endogènes et prévenir les colorations non spécifiques.
Chauffez la section dans un tampon de citrate pour démasquer les épitopes d’alpha-synucléine dans les LB.
Appliquez un agent bloquant pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Retirez l’agent bloquant en excès et incubez la section avec des anticorps primaires ciblant l’alpha-synucléine.
Lavez les anticorps non liés.
Appliquez des anticorps secondaires biotinylés qui se lient aux anticorps primaires.
Éliminez l’excès d’anticorps.
Ajoutez des complexes streptavidine-biotine-peroxydase, qui se lient aux anticorps secondaires biotinylés.
Lavez les complexes non liés.
Appliquez un substrat producteur de couleur qui réagit avec la peroxydase, formant des précipités bruns.
Retirez l’excès de substrat.
Traitez avec une contre-coloration pour colorer les noyaux en bleu, en améliorant le contraste avec l’alpha-synucléine colorée en brun dans les LB du cytoplasme neuronal au microscope.