Analyse des isoformes de l’acide glutamique décarboxylase dans le tissu cérébral humain

Commencez avec un tissu cérébral humain dans un tampon de lyse.

Homogénéisez le tissu à l’aide d’un homogénéisateur pour libérer des protéines, y compris l’acide glutamique décarboxylase, ou les isoformes de l’enzyme GAD, essentielles au fonctionnement du cerveau.

Incuber l’homogénat sur de la glace, puis centrifuger pour granuler les débris. Récupérez le surnageant contenant des protéines.

Ajouter un tampon de charge contenant un détergent et un agent réducteur pour dénaturer les protéines.

Chargez cet échantillon et un marqueur moléculaire sur un gel SDS-PAGE dégradé et l’électrophorèse pour séparer les protéines en bandes distinctes.

Électrocopiez les protéines du gel sur une feuille de membrane.

Ajoutez un agent bloquant pour empêcher la liaison non spécifique.

Incuber avec des anticorps primaires spécifiques aux isoformes GAD qui se lient à leurs isoformes réceptives GAD.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Incuber avec des anticorps secondaires marqués par fluorescence.

Lavez à nouveau et visualisez les bandes protéiques sur un système d’imagerie.

Détectez les bandes GAD par fluorescence et confirmez leurs différences de poids moléculaire à l’aide du marqueur.