Analyse au microscope électronique des lésions axonales dans le nerf optique de souris atteintes de lésions cérébrales

Isolez le nerf optique de souris transgéniques atteintes de lésions cérébrales à des intervalles définis après la blessure. Le nerf contient des neurones exprimant une protéine fluorescente.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, visualisez le nerf blessé, qui présente une augmentation progressive des gonflements et des déconnexions axonaux.

Fixer le tissu pour préserver les structures cellulaires.

Rincez le mouchoir pour éliminer l’excès de fixateur.

Traiter avec une solution d’osmium-ferrocyanure qui se lie aux lipides de la gaine de myéline et améliore le contraste pour l’imagerie.

Rincez le tissu, puis incubez dans un composé de métaux lourds qui se lie aux macromolécules et améliore le contraste.

Déshydratez le tissu en augmentant les concentrations d’alcool et incorporez-le dans une résine.

Obtenez des sections transversales et longitudinales et traitez-les avec des composés de métaux lourds, améliorant ainsi le contraste.

Au microscope électronique, les coupes longitudinales révèlent un développement progressif de gonflements axonaux avec accumulation de mitochondries gonflées, de vésicules, de bulles membranaires et de structures cytosquelettiques perturbées.

Les coupes transversales montrent une rupture progressive des gaines de myéline, indiquant une dégénérescence axonale.