Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 1:28 min • March 4th, 2025
Commencez par le liquide céphalorachidien, ou LCR, prélevé chez des personnes d’âges différents.
Centrifuger l’échantillon pour granuler les débris cellulaires et recueillir le surnageant.
Le surnageant contient des protéines impliquées dans la génération de neurones ou la neurogenèse.
Prenez une plaque multipuits recouverte de streptavidine. Ajoutez un agent bloquant pour empêcher la liaison non spécifique.
Ajouter des anticorps de capture marqués à la biotine sélectifs des protéines spécifiques liées à la neurogenèse.
Incuber en agitant pour lier les anticorps à la streptavidine, puis laver la plaque.
Ajoutez l’échantillon de LCR avec des anticorps de détection marqués au ruthénium dans les puits, puis incubez avec agitation.
Les protéines spécifiques liées à la neurogenèse se lient pour capturer les anticorps et interagissent simultanément avec les anticorps de détection.
Lavez soigneusement la plaque et ajoutez un tampon de détection.
Placez la plaque dans un système d’imagerie.
Le tampon de détection déclenche l’émission de lumière du ruthénium.
Une diminution de l’intensité lumineuse dans les échantillons indique une réduction liée à l’âge des niveaux de protéines liées à la neurogenèse, confirmant un déclin de la neurogenèse.