Étude des interactions cellule-cellule pour faciliter la maturation neuronale

Commencez par une co-culture d’astrocytes et d’agrégats de cellules souches neuronales différenciatrices dans des milieux de différenciation.

Les astrocytes sécrètent des molécules de signalisation qui améliorent la maturation et la différenciation des cellules souches en neurones et en astrocytes.

Ensuite, ajoutez un fixateur pour préserver la structure cellulaire, suivi d’un lavage.

Ajoutez une solution détergente pour perméabiliser les membranes cellulaires, puis lavez.

Introduisez un réactif de blocage pour bloquer les sites de liaison non spécifiques.

Ajoutez des anticorps primaires qui se lient spécifiquement aux marqueurs protéiques des neurones matures et des astrocytes. Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Ensuite, ajoutez des anticorps secondaires marqués par fluorescence verte et rouge et incuber. Ces anticorps se lient aux anticorps primaires respectifs, fournissant une fluorescence distincte aux cellules.

Introduisez un colorant nucléaire pour colorer les noyaux en bleu.

Enfin, observez les cellules à l’aide d’un microscope confocal.

Au sein des agrégats, les cellules fluorescentes vertes indiquent les neurones matures, tandis que les cellules fluorescentes rouges représentent les astrocytes. Cela confirme les interactions cellule-cellule dans la facilitation de la maturation neuronale.