Microscopie électronique à balayage à faisceau d’ions focalisés pour la reconstruction 3D de neurones liés synaptiquement

Prenez une section fixe de tissu cérébral cortical de souris présentant des axones et des dendrites neuronaux. Les dendrites possèdent des protubérances, appelées épines dendritiques, qui forment des synapses avec des axones.

Incuber le tissu avec du ferrocyanure d’osmium, qui se lie aux lipides, suivi d’une autre application d’osmium, qui améliore le contraste structurel pour l’imagerie.

Teinture avec un composé de métal lourd qui se lie aux macromolécules et améliore le contraste.

Déshydrater en utilisant des concentrations d’alcool croissantes pour l’enrobage de résine.

Incorporez le tissu dans de la résine, montez-le sur un support et enduisez-le d’or pour optimiser la qualité de l’image.

Utilisez la microscopie électronique à balayage à faisceau d’ions focalisés pour l’imagerie tridimensionnelle.

Utilisez un faisceau d’ions pour enlever une fine couche de tissu incrusté de résine, exposant ainsi une surface d’imagerie.

Focalisez un faisceau d’électrons sur la surface exposée et détectez les électrons rétrodiffusés pour générer une image.

Effectuez un découpage et une imagerie en série et reconstruisez une image tridimensionnelle, révélant un réseau neuronal cortical lié synaptiquement.