Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:47 min • August 29th, 2025
Fixez une souris dans un cadre stéréotaxique avec un cerveau exposé chirurgicalement contenant un sphéroïde de glioblastome pré-implanté.
Appliquez une solution saline sur le cerveau exposé pour maintenir l’hydratation des tissus.
Positionnez la sonde flexible sur la couche saline, en vous assurant que ses coussinets de contact reposent sur le dos de la souris et que les électrodes s’alignent au-dessus du glioblastome.
La sonde se compose d’un substrat polymère mince et flexible avec des électrodes dorées à motifs recouvertes d’un polymère conducteur biocompatible, assurant des performances électriques optimales et une compatibilité tissulaire.
Absorbez l’excès de solution saline, ne laissant qu’une fine couche.
Appliquez un adhésif silicone pour stabiliser les électrodes, puis placez un verre de protection.
Appliquez du ciment dentaire autour de la vitre de protection et fixez les coussinets de contact au dos de la souris.
Construisez un puits de ciment pour l’insertion de fluide.
Plus tard, administrez une analgésie post-chirurgicale et maintenez un soutien thermique pour la récupération de la souris.
Les électrodes implantées délivrent des impulsions électriques au-dessus du glioblastome pour une thérapie ciblée par champ électrique pulsé dans des applications neurothérapeutiques.
Placez une goutte de DPBS pour couvrir la craniotomie. Placez l’électrode flexible sur la goutte de DPBS et placez doucement l’arrière de la sonde avec les coussinets de contact sur le dos de la souris. Absorbez la goutte DPBS avec un petit morceau de papier jusqu’à ce que la sonde puisse reposer à plat sur la dure-mère et suivre la courbure du cerveau, en veillant à ce que la petite couche de solution saline reste sous les électrodes pour agir comme une barrière contre le débordement de colle.
Placez une petite goutte d’adhésif silicone sur la sonde et couvrez-la d’un verre de couverture rond de cinq millimètres. Poussez le verre de protection vers le bas jusqu’à ce que le silicone soit uniformément réparti et que la distance entre le verre de protection et la sonde soit minimale. Attendez ensuite 30 secondes que le silicone se solidifie.
Pour fixer le verre de protection, appliquez rapidement de la superglue sur ses côtés et poussez-la vers le bas jusqu’à ce que la colle devienne solide. Appliquez de la super colle au niveau du col de la sonde à l’aide d’un cure-dent, en veillant à ce que la super colle soit tirée sous le cou pour fournir un support stable. Couvrez le crâne avec du ciment dentaire pour construire un capuchon chronique et prenez soin de ne couvrir que les bords du verre de couverture.
Soulevez l’arrière de la sonde et appliquez du ciment sous le col de la sonde. Placez le reste de la sonde sur le ciment avant qu’il ne durcisse. Appuyez doucement sur le col de la sonde pour placer sa surface au même niveau que le verre de protection et non dans le chemin de l’objectif du microscope pendant l’expérience.
Couvrez le haut du col de la sonde avec pas plus de 1,5 millimètre de couche de ciment dentaire pour obtenir un maintien ferme sur la sonde. Construisez un puits de ciment présentant une crête de 1,5 millimètre à un à deux millimètres autour du verre de couverture pour créer un bassin pour le fluide d’immersion pour l’imagerie à deux photons. Une fois le ciment durci, administrez une analgésie postopératoire et gardez l’animal au chaud jusqu’à ce qu’il se rétablisse en l’enveloppant dans une serviette en papier et en le plaçant près d’une ampoule infrarouge.