Transfert de gènes dans les cellules de Schwann du nerf sciatique de rongeur par électroporation

Commencez avec un rat nouveau-né anesthésié placé sur un coussin chauffant avec un nerf sciatique exposé.

Soulevez le site distal du nerf et injectez une solution d’ADN plasmidique mélangée à un colorant. Le colorant aide à suivre l’administration du plasmide.

Placez une électrode de type pince à épiler autour du nerf, en maintenant un petit espace entre les bras d’électrodes.

Introduisez une solution saline dans cet espace pour la conduction du courant.

Appliquez une impulsion électrique autour des fibres nerveuses qui crée des pores membranaires transitoires dans les cellules de Schwann. Ensuite, inversez les positions des électrodes et appliquez une deuxième impulsion électrique. Cela améliore l’entrée de l’ADN plasmidique à travers les pores.

Après électroporation, la membrane cellulaire se referme et piège le plasmide.

Nettoyez le site, scellez l’incision cutanée, désinfectez-la et laissez le rat se rétablir.

Plus tard, l’ADN plasmidique se déplace vers le noyau et s’intègre dans l’ADN des cellules de Schwann, ce qui permet un transfert de gènes réussi.

Tirez doucement sur le côté distal du nerf à l’aide d’une aiguille pour soulever le nerf exposé. Insérez la micropipette en verre dans le site distal du nerf et injectez la solution d’ADN en appliquant une légère pression positive jusqu’à ce que le nerf apparaisse vert. Ensuite, placez une électrode de platine de type pince à épiler à environ un à deux millimètres du nerf.

Remplissez l’espace entre l’électrode et le nerf avec une solution de chlorure de sodium à 0,9 %. Appliquez des impulsions électriques sur le site d’injection à l’aide d’un électroporateur. Après la première série d’impulsions, inversez l’électrode et appliquez une autre série d’impulsions.

Ensuite, nettoyez le site d’électroporation avec une solution de chlorure de sodium à 0,9 %. Après l’électroporation, fermez l’incision avec de la colle cyanoacrylate. Ensuite, nettoyez la plaie avec de la povidone iodée.

Retirez le masque facial de l’animal et gardez-le sur le chauffe-visage électrique pendant au moins une heure pour permettre une récupération complète de l’anesthésie