Injection de peptides auto-assemblés et de cellules précurseurs neurales pour la réparation de la moelle épinière dans un modèle de rat

Fixez un rat anesthésié avec une lésion de la moelle épinière cervicale sur un cadre stéréotaxique.

Le site de la lésion se compose d’axones endommagés et de cavités remplies de liquide entourées de cellules immunitaires infiltrées, de cellules gliales et de fibroblastes, qui entravent la repousse axonale et la récupération fonctionnelle.

Désinfectez et incisez la peau au-dessus de la colonne vertébrale. Disséquez les muscles pour exposer la dure-mère, le revêtement extérieur de la moelle épinière.

Exciser le tissu cicatriciel de la dure-mère pour révéler le site de la lésion de la moelle épinière.

Placez une microseringue au-dessus de la lésion, contenant des peptides auto-assemblés (SAP), et injectez-les

dans le noyau de la lésion d’un côté de la ligne médiane.

Répétez l’injection du côté opposé pour une répartition uniforme.

Ensuite, injectez des cellules précurseurs neurales (NPC) aux sites entourant la lésion, en évitant le noyau de la lésion enflammé pour améliorer la survie des NPC.

Une fois injectés, les SAP s’auto-assemblent en un échafaudage qui imite la matrice extracellulaire et comble les cavités. L’échafaudage soutient la survie des NPC et leur différenciation en cellules neurales pour le remodelage tissulaire.

L’injection est effectuée 14 jours après la lésion de la moelle épinière. Avant de commencer l’opération, préparez les SAP à une concentration de 1 % en poids par volume dans de l’eau stérile et remplissez un capillaire en verre de 100 micromètres attaché à une seringue Hamilton avec la solution.

Fixez la seringue Hamilton au cadre stéréotaxique. Après avoir anesthésié le rat, fixez la tête dans le cadre stéréotaxique et désinfectez le site de la chirurgie avec de la povidone iodée et de l’alcool à 70 % comme auparavant. Encore une fois, après avoir ouvert la peau, disséquez soigneusement la paire de muscles vertébraux et insérez des écarteurs.

Utilisez un scalpel numéro 15 pour retirer le tissu cicatriciel de la dure-mère et réexposer le site de la lésion. Utilisez ensuite la pointe d’une aiguille pointue pour ouvrir la dure-mère avec précaution. Enfin, par stéréotaxie, insérez le capillaire de verre à une profondeur de deux millimètres dans la moelle épinière traumatisée et injectez les SAP.

Après l’injection des SAP, laissez le capillaire rester au site d’injection pendant une minute avant de le retirer pour permettre l’étirement des tissus afin de s’adapter à la solution injectée. Ensuite, répétez l’injection au site suivant. Ici, des NPC ont été isolés de la zone paraventriculaire d’une souris rouge SD adulte et cultivés selon des procédures précédemment publiées.

Juste avant la micro-injection, diluez les NPC dans le milieu de croissance à une concentration de 50 fois 10 à la troisième cellules vivantes par microlitre pour la transplantation cellulaire et chargez-les dans un capillaire en verre sur une seringue Hamilton. Les NPC sont injectés immédiatement après l’injection des PAS. Pour ce faire, insérez le capillaire en verre de la seringue Hamilton à 0,2 millimètre rostral du site de la blessure et à 1,5 millimètre sous la surface dorsale de la moelle épinière.

Injectez deux microlitres de suspension cellulaire à un rythme d’environ 0,5 microlitre par minute. Une fois la première injection terminée, laissez le capillaire rester dans la moelle épinière pendant une minute comme auparavant. Ensuite, rétractez le capillaire, déplacez-le vers un site adjacent et répétez la procédure d’injection. Après avoir attendu une minute, comme précédemment, rétractez le capillaire et déplacez-le de deux millimètres de codding jusqu’au site de la blessure.

Effectuez deux injections de deux microlitres à cet endroit.