JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 3:19 min • August 29th, 2025
Commençons par une souris anesthésiée avec le crâne exposé.
Le crâne présente une craniotomie sur l’os interpariétal, à gauche de la ligne médiane, et caudale à la suture lambdoïde, la dure-mère étant retirée pour exposer le cervelet.
Aspirez le cervelet latéral gauche pour révéler le noyau cochléaire dorsal sous-jacent ou DCN, une structure du tronc cérébral qui contient des neurones traitant des signaux auditifs.
Ajoutez une solution saline pour prévenir la coagulation sanguine et éliminer le liquide résiduel.
Positionnez une microseringue contenant un vecteur viral codant pour l’opsine, un canal ionique sensible à la lumière.
Abaissez l’aiguille dans le DCN.
Injectez la suspension virale à un rythme contrôlé, puis retirez l’aiguille.
Suturez l’incision et laissez la souris récupérer.
Le virus injecté se lie aux récepteurs neuronaux de la DCN et subit une endocytose.
À l’intérieur du noyau neuronal, l’ADN viral déclenche l’expression des gènes, conduisant à la production d’opsine.
Le modèle est prêt pour la stimulation de la voie auditive induite par la lumière.
À l’aide d’un tube d’aspiration à cinq français, aspirez la partie la plus latérale du cervelet gauche, recouvrant le DCN. Pour faciliter l’aspiration, réglez le plan focal du microscope à la profondeur attendue du noyau cochléaire afin d’améliorer la visualisation et d’assurer une image nette. Retirez environ un quart à un tiers du cervelet gauche.
Le principal point de repère adjacent à la DCN est l’ampoule du canal semi-circulaire supérieur. Après l’aspiration, d’autres saignements, une accumulation de liquide céphalo-rachidien et un déplacement du cervelet sur la DCN apparaîtront. Instillez rapidement une solution saline dans la craniotomie pour prévenir la coagulation sanguine. Utilisez une combinaison de tamponnage doux avec une pointe dentaire et d’aspiration pour dégager un chemin pour une visualisation directe du DCN.
Une fois que le DCN est clairement visible et exempt de sang et de LCR sus-jacents, effectuez une micro-injection sous pression du vecteur avec une seringue Hamilton étanche au gaz de cinq microlitres. Utilisez une aiguille de calibre 34 avec un biseau peu profond pour minimiser les traumatismes contondants et localiser le volume d’injection dans le DCN. Ensuite, introduisez lentement l’aiguille à l’aide d’un micro-manipulateur jusqu’à ce que la pointe ne soit plus visible sous la surface du DCN.
Commencez à injecter 1,5 microlitre du vecteur. Une fois cela terminé, retirez lentement l’aiguille, puis rapprochez la peau et laissez la souris récupérer selon la procédure de récupération standard.