Régénération axonale du nerf sciatique d’une souris suite à une blessure par écrasement

Commençons par le nerf sciatique isolé d’une souris.

Les neurones du nerf ont été transfectés pour exprimer des protéines cytoplasmiques fluorescentes.

Le nerf a été écrasé pour induire une blessure, qui a été marquée par une suture.

Les segments axonaux blessés sur le site dégénèrent et les macrophages recrutés éliminent les débris.

Les cellules de Schwann prolifèrent pour former des pistes de guidage et sécrètent des facteurs neurotrophiques qui favorisent la repousse des axones. Les axones s’étendent le long de ces pistes, régénérant le nerf.

Fixez le nerf pour préserver les structures cellulaires, puis retirez tous les tissus non neuronaux attachés.

Laver avec un tampon pour éliminer les fixateurs résiduels.

Positionnez le nerf sur une lame de microscope, appliquez un support de montage et placez une lamelle.

Aplatissez le nerf pour positionner les axones dans le même plan focal pour l’imagerie.

À l’aide d’un microscope à épifluorescence, tracez les axones du site d’écrasement à leurs extrémités distales pour

mesurer la longueur de régénération.

Séparez soigneusement les DRG avec les racines nerveuses et le nerf sciatique, avec des micro-ciseaux et des micro-pinces sous le microscope de dissection.

Ensuite, transférez le nerf sciatique directement dans 4 % de PFA pendant la nuit à quatre degrés Celsius. Pour imager et mesurer les axones sensoriels marqués par fluorescence au microscope de dissection, retirez soigneusement le tissu et la membrane attachés au nerf sciatique fixe à l’aide de micro-ciseaux et de micro-pinces. Ensuite, lavez le nerf avec du PBS trois fois.

Ensuite, placez le nerf sciatique sur une lame et maintenez-le droit. Ajoutez 80 microlitres de solution anti-décoloration autour du nerf, puis posez une lamelle de couverture dessus. Aplatissez tout le tissu monté avec une pression.

Ensuite, placez le tissu aplati sous le microscope épifluorescent inversé, équipé d’un accessoire pour l’acquisition de mosaïque et le traitement d’image. Lorsque vous mesurez la longueur des axones régénérés, tracez tous les axones identifiables marqués par fluorescence dans le nerf sciatique, du site d’écrasement aux extrémités distales des axones.