Administration ciblée de médicament dans un modèle murin par injection de citerne magna

Commencez avec une souris anesthésiée exprimant un gène marqueur fluorescent et fixée dans un cadre stéréotaxique.

La tête est inclinée vers le bas pour faciliter l’accès à la citerne magna, le liquide céphalo-rachidien ou l’espace rempli de LCR entre le cervelet et le tronc cérébral.

Appliquez une pommade pour les yeux, rasez le cou et stérilisez.

Faites une incision médiane pour exposer la membrane recouvrant la citerne magna.

Rétractez les tissus à l’aide d’un séparateur pour accéder à la citerne magna.

Prenez une microseringue remplie d’un médicament inducteur et munie d’une aiguille pliée.

Insérez l’aiguille et percez la membrane pour atteindre la citerne magna.

Injectez lentement le médicament pour une dispersion uniforme dans le LCR.

Le médicament pénètre dans les cellules de surface du cerveau et déclenche l’expression du gène marqueur, produisant des protéines fluorescentes rouges.

Le flux de LCR empêche la diffusion du médicament dans les régions cérébrales plus profondes.

L’imagerie par fluorescence confirme le marquage sélectif des cellules de surface, démontrant une administration ciblée du médicament dans les régions exposées au LCR.

Anesthésier l’animal dans la chambre d’isoflurane.

Ajustez ensuite le support de tête de souris de manière à ce que l’embout buccal soit à un angle d’environ 30 degrés par rapport à la surface de la table chirurgicale et fixez la tête de l’animal sur le support. Pour améliorer l’accessibilité à la citerne magna, positionnez le corps de l’animal à environ 30 degrés de la surface de la table avec la tête inclinée vers le bas, ce qui établira un angle de 120 degrés avec le reste du corps et étendra l’arrière du cou pour faciliter l’accès à la citerne magna. Une fois que l’animal est correctement positionné, appliquez une pommade ophtalmique, rasez l’arrière de son cou et désinfectez la zone avec des lingettes imbibées d’alcool et de la bétadine.

Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une incision médiane commençant au niveau de l’os occipital et s’étendant vers l’arrière. Séparez doucement le tissu conjonctif superficiel et les muscles du cou en tirant latéralement à partir de la ligne médiane avec une pince à épiler à pointe fine qui exposera la membrane durale recouvrant la citerne magna. Positionnez un petit séparateur chirurgical pour permettre la visualisation de la citerne magna tout au long de la procédure.

Identifiez l’extrémité caudale de l’os occipital et insérez l’aiguille précédemment pliée immédiatement en dessous. Une fois la dure-mère perforée, laissez la pointe pliée de l’aiguille pénétrer sous la surface en tirant doucement la seringue vers le haut et parallèlement au corps de l’animal, ce qui assurera une meilleure stabilité. Injectez lentement le composé pour éviter d’interférer avec l’écoulement naturel du liquide céphalo-rachidien.

Après l’injection, laissez l’aiguille reposer à l’intérieur pendant une minute, puis retirez-la soigneusement à l’aide d’une pince à pointe fine.