JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 3:13 min • August 29th, 2025
Prenez un mélange de virus contenant un gène souhaité pour la transduction et un colorant de suivi dans un tampon.
Aspirez le mélange virus-colorant dans un capillaire à pointe fine.
Prenez une souris enceinte anesthésiée avec une région abdominale rasée.
Désinfectez la peau avec de l’éthanol, suivi d’une solution de bétadine.
Faites une incision médiane pour exposer la cavité abdominale et placez un film de paraffine dessus.
Exposez les cornes utérines et versez un tampon dessus pour éviter la sécheresse.
Notez l’ordre et la position des embryons. Ajustez la position de l’embryon dans le sac utérin pour accéder aux sites d’injection.
Injectez le mélange virus-colorant dans la moelle épinière et les ventricules cérébraux.
Assurez une injection précise en visualisant la distribution du colorant.
Remettez les cornes utérines dans la cavité abdominale et versez un peu de tampon.
Suturez la cavité abdominale, puis la peau.
Le virus injecté pénètre dans la cellule hôte, libérant le gène cible et permettant son expression.
Commencez par charger un embout capillaire personnalisé contenant quatre fois 10 à 11 particules virales d’enrobage viral de virus adéno-associé de type 1 pour la cible souhaitée, et étiqueté avec un colorant Fast Green sur un tube d’aspirateur. Ajoutez 15 microlitres de particules virales adéno-associées marquées dans le capillaire.
Ensuite, confirmez une absence de réponse au pincement de l’orteil chez une souris enceinte embryonnaire anesthésiée au jour 14,5 et désinfectez la peau. Utilisez une pince à iris dentelée incurvée et des ciseaux droits en carbure de tungstène pour faire une incision cutanée le long de la ligne médiane. À l’aide d’une pince à épiler Dumont droite pour saisir la paroi péritonéale, continuez le long de la linea alba avec des ciseaux Vannas droits et placez un morceau de film de paraffine fenestré sur l’ouverture abdominale et utilisez un appareil semblable à une cuillère pour exposer les cornes utérines sans endommager les embryons à l’intérieur des cornes.
Après avoir appliqué quelques gouttes de PBS à 37 degrés Celsius sur les cornes utérines, inspectez les embryons à la recherche de dommages ou de malformations à l’intérieur du sac utérin. Retournez soigneusement les embryons à l’intérieur de leurs sacs jusqu’à ce que la position souhaitée pour chaque injection soit atteinte. Lorsque les embryons sont en place, injectez un à deux microlitres de la solution de particules virales étiquetée Fast Green dans chaque embryon.
Une fois que tous les embryons ont été injectés, replacez les cornes utérines dans la cavité abdominale et ajoutez quelques gouttes de PBS à 37 degrés Celsius dans l’abdomen. Utilisez ensuite des sutures en polyamide 6-0 pour fermer la paroi péritonéale et des sutures en polyamide 3-0 et une pince hémostatique Halsted Mosquito pour fermer la peau.