Séparation des fractions membranaires internes et externes des bactéries à Gram négatif

Commencez par la fraction membranaire totale d’une bactérie à Gram négatif, y compris les vésicules membranaires internes et externes, en suspension dans un saccharose à faible densité qui préserve l’intégrité structurelle.

Pour séparer les vésicules membranaires, ajoutez séquentiellement des solutions de saccharose de haute densité et de densité moyenne dans un tube d’ultracentrifugation.

Ensuite, ajoutez la fraction membranaire et le saccharose à faible densité pour créer un gradient discontinu de saccharose.

Ultracentrifugeuse pour séparer les vésicules en fonction de leur densité.

Les vésicules de la membrane interne moins denses forment une couche au sommet.

Les vésicules de la membrane externe plus denses, riches en lipopolysaccharides et en protéines, forment une bande à l’interface des solutions de saccharose de moyenne et haute densité.

Récupérez la couche interne de la membrane et jetez la solution de gradient en laissant une petite quantité.

Ensuite, récupérez la couche de membrane externe.

Ajoutez une mémoire tampon de stockage à chaque fraction pour la stabilisation.

Centrifuger pour séparer les vésicules et retirer le surnageant.

Remettez en suspension les vésicules membranaire