Dosage de la réplication de Legionella pneumophila dans les macrophages prétraités avec des vésicules membranaires externes

Commencez avec une plaque multipuits contenant des macrophages prétraités exposés à des vésicules de membrane externe bactériennes de Legionella pneumophila, ou OMV.

Ajoutez Legionella pneumophila à un rapport bactérie-cellule hôte défini pour infecter les macrophages traités par OMV.

Pendant l’incubation, les macrophages internalisent les bactéries dans des phagosomes liés à la membrane.

Le

prétraitement OMV modifie la signalisation des macrophages, inhibant la maturation des phagosomes.

Cela facilite la formation d’une vacuole contenant des légionelles, qui protège les bactéries et permet la réplication intracellulaire.

Ajoutez un détergent et incubez pour lyser les macrophages. Cela libère les bactéries intracellulaires dans le milieu.

Étalez le lysat dilué sur une plaque de gélose enrichie en nutriments.

Pendant l’incubation, les bactéries se développent et forment des colonies visibles.

Comptez les colonies pour déterminer les unités formant des colonies, ou UFC, représentant le nombre de bactéries viables.

Comparez le nombre d’UFC entre les macrophages traités par OMV et ceux qui ne le sont pas.

Une UFC plus élevée chez les macrophages traités par OMV par rapport aux macrophages non tr