Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:37 min • August 29th, 2025
Prenons l’exemple de colonies bactériennes transformées à l’aide d’un plasmide contenant un gène inductible.
Choisissez une seule colonie pour inoculer un milieu liquide frais.
Incuber en secouant pour l’oxygénation et la croissance bactérienne homogène.
Utilisez un échantillon de culture dilué pour mesurer l’absorbance et estimer la densité cellulaire.
Prenez une plaque à fond de verre à paroi noire pour éviter la diaphonie légère entre les échantillons, assurant ainsi une quantification précise de la luminescence.
Ajouter la culture bactérienne avec la concentration cellulaire souhaitée dans les puits.
Ajoutez un antibiotique pour maintenir la rétention plasmidique.
Ajoutez un inducteur pour initier l’expression des gènes.
Le gène code pour une enzyme qui réagit avec une protéine bactérienne spécifique pour produire de la lumière, donnant à la bactérie des propriétés bioluminescentes.
Placez un couvercle sur la plaque pour éviter l’évaporation avant de la placer dans un lecteur de plaques à température contrôlée avec un mode d’agitation constante.
À intervalles réguliers, enregistrez l’absorbance pour mesurer le nombre de cellules et l’intensité lumineuse afin de surveiller la bioluminesce
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