Cultiver des bactéries magnétospirillum et évaluer leur comportement magnétotactique

Les magnétospirillum sont des bactéries mobiles qui se développent dans un faible taux d’oxygène.

Ils produisent des nanocristaux magnétiques qui agissent comme des dipôles magnétiques, les aidant à naviguer dans le champ géomagnétique vers une concentration optimale d’oxygène.

Pour cultiver Magnetospirillum, prenez un milieu liquide sans oxygène. Injectez un volume contrôlé d’oxygène pour établir des conditions microaérobies, ajoutez des bactéries et incuberez.

Au fil du temps, la turbidité augmente, ce qui indique une croissance bactérienne.

Pour préparer une culture semi-solide, utilisez un milieu contenant un indicateur d’oxygène rose qui devient incolore dans la zone de faible teneur en oxygène, marquant l’interface oxique-anoxique (OAI) avec une

concentration d’oxygène optimale.

Inoculez les bactéries à l’OAI, scellez le tube et incuberez.

Les bactéries se multiplient pour former une bande qui migre vers le haut au fur et à mesure que l’oxygène est consommé.

Pour évaluer le comportement magnétotactique, préparez une goutte suspendue des bactéries cultivées et placez un aimant près de celle-ci.

Au microscope, observez la nage directionnelle vers l’aimant et l’inversion du mouvement lorsque l’aimant est retourné.

Pour inoculer les souches MSR-1, AMB-1 et MS-1 dans un milieu liquide, allumez le haut des bouteilles d’oxygène et de milieu frais en appliquant de l’éthanol sur les bouchons et en les passant à travers la flamme d’un bec Bunsen.

À l’aide d’une seringue stérile et d’une aiguille, extrayez un millilitre d’oxygène de la bouteille d’oxygène et transférez-le dans la bouteille de milieu frais. Si vous utilisez l’inoculum d’une autre culture cultivée dans une bouteille en verre, flambez les deux bouteilles. Ensuite, inoculez un millilitre de l’ancienne culture dans le milieu frais.

Incuber la culture à 32 degrés Celsius et l’inoculer dans un milieu frais après quatre à sept jours. Pour inoculer MSR-1 dans un gradient d’oxygène, milieu semi-solide, vérifiez que le tube du milieu frais présente une OAI bien définie, matérialisée par une interface rose à incolore à environ un à trois centimètres sous la surface du milieu. Si l’inoculum provient d’une autre culture semi-solide à gradient de concentration en oxygène, récoltez les bactéries en aspirant 50 microlitres de la culture avec une pointe de pipette stérile placée sur la bande formée par les bactéries.

Inoculez lentement ces bactéries à l’OAI dans le milieu frais, en évitant de perturber l’interface. Fermez le tube et laissez les bactéries se développer entre 25 et 30 degrés Celsius. Pour vous assurer que les bactéries sont à la fois magnétiques et modales, placez une goutte de culture sur la lamelle du microscope.

Retournez la lamelle de recouvrement et installez-la sur un joint torique reposant sur une glissière en verre. Assurez-vous que la chute ne touche pas la glissière inférieure. Placez la goutte suspendue sous un microscope et concentrez-vous sur un bord de la gouttelette.

Placez le pôle sud d’un aimant près de ce bord et regardez les bactéries nager vers le bord. Retournez l’aimant pour les faire nager dans la direction opposée.