Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:46 min • September 26th, 2025
Prenez une culture de Mycobacterium tuberculosis cultivée dans un milieu limitant le fer pour favoriser la sécrétion de vésicules extracellulaires contenant des sidérophores, un chélateur du fer.
Centrifugeuse pour granuler les bactéries.
Récupérez le surnageant et filtrez-le pour éliminer les bactéries résiduelles.
Transférez le filtrat dans un système d’ultrafiltration agité et filtrez pour éliminer l’excès de média et concentrer les VE.
Centrifuger le concentré pour granuler les débris cellulaires.
Transférez le surnageant dans un tube ultracentrifuge et centrifugez-le pour recueillir la pastille EV.
Jetez le surnageant, remettez la pastille en suspension dans un tampon et mélangez-la avec un milieu à gradient de densité concentré pour former la couche inférieure.
Superposer avec des concentrations décroissantes du milieu de gradient pour créer un gradient de densité discontinu.
Ajoutez un tampon en haut et centrifugez. Les VE migrent vers la couche qui correspond à leur densité flottante.
Collectez chaque fraction dans un tube séparé.
La fraction purifiée avec des VE contenant des sidérophores est prête pour les études en aval.
Transférez la culture dans cinq tubes à centrifuger coniques
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques