Isolement et enrichissement de vésicules extracellulaires dérivées de la membrane externe à partir de bactéries
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:53 min • September 26th, 2025
Commencez par inoculer une colonie de bactéries génétiquement modifiées dans un milieu liquide.
Ces bactéries expriment une protéine de fusion fluorescente dans la membrane externe, une couche protectrice externe.
Incuber pour que les bactéries libèrent des vésicules extracellulaires (VE), des nanostructures membranaires impliquées dans la communication intercellulaire, qui incorporent la protéine fluorescente.
Transférez la culture dans une bouteille et centrifugez à basse vitesse pour granuler les cellules.
Transférez le surnageant contenant les VE, les protéines cellulaires et les débris cellulaires. Centrifugez à grande vitesse et retirez le surnageant contenant les débris.
Filtrez le surnageant à travers une membrane pour éliminer les bactéries et les débris restants.
Inoculer un échantillon sur de la gélose et l’incuber. L’absence de formation de colonies bactériennes confirme l’absence de bactéries.
Transférez la solution dans un appareil d’ultrafiltration doté d’une membrane semi-perméable et centrifugez-la pour piéger les VE tout en éliminant les protéines plus petites.
Collectez les VE concentrés dans un tube pour une analyse en aval.
Commencez par inoculer des colonies uniques d’
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques