Évaluation de l’attachement du pneumocoque aux cellules endothéliales humaines primaires sous un flux de milieu constant
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:20 min • September 26th, 2025
Placez une lame de canal recouverte de gélatine, reliée à une pompe microfluidique, sur une platine de microscope.
La lame contient des cellules endothéliales humaines primaires cultivées sous un milieu fluide, avec des chaînes de facteur de von Willebrand ou VWF, une glycoprotéine, à la surface de la cellule.
Ces chaînes sont générées en stimulant les cellules avec de l’histamine.
Le flux de fluide contrôlé, appliqué par la pompe microfluidique, favorise la sécrétion et le déroulement du VWF. Cela expose des domaines de liaison spécifiques sur les chaînes VWF.
Arrêtez le flux de fluide, ajoutez un anticorps spécifique du VWF conjugué à un fluorophore vert et reprenez le flux pour marquer les chaînes avec l’anticorps.
Interrompre le flux de média et introduire des bactéries pneumocoques exprimant des protéines fluorescentes rouges.
Redémarrez le flux pour distribuer les bactéries, permettant la fixation aux domaines exposés par des adhérences de surface.
À l’aide de la microscopie à fluorescence, visualisez la liaison bactérienne en temps réel aux cordes.
Arrêtez le flux de fluide et acquérez des images de la pile Z pour quantifier l’attachement bactérien aux cellules endothéliales.
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