Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:48 min • September 26th, 2025
Prenez une cuvette contenant une solution de travail de thioflavine T, un colorant fluorescent spécifique de l’amyloïde, dissous dans une solution saline tamponnée au phosphate.
Placez la cuvette dans un spectrofluorimètre et enregistrez le signal de fluorescence de base.
Mettez le balayage en pause et retirez la cuvette.
Ajouter le surnageant de culture stérilisé par filtre prélevé sur des cellules endothéliales pulmonaires infectées par des bactéries Pseudomonas virulentes.
Le surnageant contient des agrégats amyloïdes, qui sont des protéines mal repliées et riches en feuillets bêta.
Mélangez doucement le contenu par inversion pour assurer une répartition uniforme.
Rechargez la cuvette dans le spectrofluorimètre et reprenez le balayage pour acquérir un signal de fluorescence basé sur le temps.
La thioflavine T se lie spécifiquement aux amyloïdes riches en feuillets bêta, ce qui conduit à une fluorescence accrue.
Effectuez un balayage de fluorescence en utilisant les mêmes paramètres.
Une augmentation de la fluorescence par rapport à la ligne de base indique la présence et l’abondance relative d’amyloïdes induites par l’infection dans le surnageant de culture.
Pour quantifier les amyloïdes
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